Оценка эффективности промоторов Corynebacterium glutamicum и их использование для усиления активности генов у лизин-продуцирующих бактерий

Автор: М.Г. Тарутина, Н.М. Раевская, Т.Е. Шустикова, Л.Е. Рябченко, А.С. Яненко

Страница: 16-24

Оценка эффективности промоторов Corynebacterium glutamicum и их использование для усиления активности генов у лизин-продуцирующих бактерий

Биотехнология, 2015, № 6, С. 16-24

УДК 577.4

Раздел:  «Продуценты, биология, селекция, генетическая инженерия»

М.Г. Тарутина,  Н.М. Раевская,  Т.Е. Шустикова ^*,  Л.Е. Рябченко,  А.С. Яненко ^*

ФГУП “Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов” (ГосНИИгенетика),  Москва, 117545

e-mail:  igenetic@yandex.ru,  yanenko@genetika.ru

На основе репликативного вектора pNS2 и репортерного гена cat из транспозона Tn9, кодирующего хлорамфениколацетилтрансферазу, сконструирован вектор pNS-cat72 для клонирования промоторов разных генов и оценки их силы по устойчивости к хлорамфениколу в клетках штаммов Corynebacterium glutamicum. С помощью этого вектора изучена сила промоторов различных генов у штамма Corynebacterium glutamicum GEN1-2 (lys^{CA279T, S317A}), содержащего аспартокиназу, устойчивую к ретроингибированию лизином и треонином. Обнаружено, что промоторы генов eftu, sod, cspB и leuC обеспечивают более высокий уровень устойчивости к хлорамфениколу, чем промоторы генов lysC, pyc, tkt, fbp, вовлеченных в контроль биосинтеза лизина. Показано, что замена собственного промотора гена ddh на промотор sod увеличивает уровень транскрипции почти в 10 раз, при этом активность фермента диаминопимелатдегидрогеназы усиливается в 3—4 раза, что приводит к увеличению продукции лизина клетками на 9%. Охарактеризованный набор промоторов разной силы является необходимым инструментом для оптимизации работы генов при конструировании штаммов-продуцентов клеточных метаболитов.

Ключевые слова:  активность фермента,  промоторы,  синтез лизина,  экспрессия гена,  Corynebacterium glutamicum.

Полная версия данной статьи находится на сайте журнала «Биотехнология» по адресу:  http://www.biotechnology-journal.ru/jour/article/view/105  и  на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=25482113

23.09.2016, 4913 просмотров.