Технология очистки гибридных рекомбинантных онкопротеинов Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов, конъюгированных с белком теплового шока 70

Автор: М.А. Жученко, Н.А. Шамонов, С.А. Черепушкин, Н.А. Гаврилова

Страница: 54-63

Технология очистки гибридных рекомбинантных онкопротеинов Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов, конъюгированных с белком теплового шока 70

Биотехнология, 2015, № 3, С. 54-63

УДК 577.112.083

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

М.А. Жученко ^*,  Н.А. Шамонов,  С.А. Черепушкин,  Н.А. Гаврилова

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов»,  Москва, 117545

e-mail:  axiflipper@gmail.com

На начальном этапе работ использовали никель-хелат-аффинную хроматографию для извлечения гибридных белков Е7-БТШ70 из дрожжевого лизата. Невысокая степень чистоты мономерной формы Е7-БТШ70 в целевой фракции обусловлена наличием димерных и тетрамерных агрегатов целевого белка и низкомолекулярных примесей. Введение в процедуру очистки этапа добавления восстановленного L-глутатиона с целью снижения образования нежелательных дисульфидных связей позволило увеличить чистоту целевого белка за счет уменьшения уровня продуктов олигомеризации. Дальнейшие модификации очистки, предусматривающие снижение гидрофобных взаимодействий при введении глицерина, значительно сократили количество низкомолекулярных примесей. Для более тонкой очистки Е7-БТШ70 использовали двухстадийный процесс анионообменной хроматографии, позволивший эффективно удалить низкомолекулярные примеси. Оценка финального материала методом электрофореза в невосстанавливающих условиях показала, что чистота мономерной формы обоих белков превышает 95%.

Ключевые слова:  белок теплового шока,  димеризация,  онкобелок Е7,  хроматографическая очистка.

Полная версия данной статьи находится на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=23856232

08.09.2015, 5246 просмотров.