Разработка и применение метода рвПЦР для анализа остаточной ДНК штамма-продуцента в субстанции гистона Н1.3

Автор: Е.В. Ковалева, А.П. Баранник, Ю.С. Скоблов, Е.Д. Шибанова, В.И. Швец

Страница: 65-75

Разработка и применение метода рвПЦР для анализа остаточной ДНК штамма-продуцента в субстанции гистона Н1.3

Биотехнология, 2015, № 2, С. 65-75

УДК 557.112.823

Раздел:  «Метрология, стандартизация, контроль»

Е.В. Ковалева ^{1, 2, *},  А.П. Баранник ²,  Ю.С. Скоблов ²,  Е.Д. Шибанова ²,  В.И. Швец ¹

¹  Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова,  119571, Москва

²  Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова» РАН,  117997, Москва

e-mail:  katja_kov@mail.ru,  kovaleva@kou.ibch.ru

В данной работе предлагается количественный метод ПЦР в реальном времени (рвПЦР) с использованием специфических праймеров к фрагменту гена 16S РНК E. coli применить для определения остаточной ДНК штамма-продуцента E. coli BL21(DE3)/prhH1.3 в активной фармацевтической субстанции (АФС) рекомбинантного человечеcкого гистона Н1.3. Проведена оптимизация пробоподготовки, создан рабочий стандартный образец на основе ДНК штамма-продуцента, обработанной ультразвуком, подобран ампликон для рвПЦР. Оценена специфичность разработанных праймеров в сравнении с ДНК эукариот. Проведен анализ эффективности метода в сравнении с коммерческим набором. Разработанные праймеры к гену 16S PHK оказались в 30 раз чувствительнее праймеров референсного коммерческого набора.

Ключевые слова:  активная фармацевтическая субстанция,  гистон,  остаточная ДНК,  ПЦР в реальном времени.

Полная версия данной статьи находится на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=23746042

14.09.2015, 4495 просмотров.