Выделение и идентификация гибридного рекомбинантного онкопротеина Е7 вируса папилломы человека 16 типа, конъюгированного с белком теплового шока 70

Автор: М.А. Жученко, Н.А. Шамонов, М.В. Серебрякова, С.А. Черепушкин

Страница: 29-37

Выделение и идентификация гибридного рекомбинантного онкопротеина Е7 вируса папилломы человека 16 типа, конъюгированного с белком теплового шока 70

Биотехнология, 2015, № 1, С. 29-37

УДК 573.6.086.83:577.21:[615.373.3+615.277]

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

М.А. Жученко ^{1, *},  Н.А. Шамонов ¹,  М.В. Серебрякова ^{1, 2},  С.А. Черепушкин ¹

¹  Государственный научный центр Российской Федерации ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов» («ГосНИИгенетика»),  Москва, 117545

²  Научно исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского,  Москва

e-mail:  axiflipper@gmail.com

Ген рекомбинантного онкопротеина Е7 вируса папилломы человека 16 типа, конъюгированного с белком теплового шока 70 (Е7(16)-БТШ70), был экспрессирован в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Для получения целевого белка, его первичной идентификации и установления его подлинности был проведен ряд хроматографических выделений. Использование металл-хелатной хроматографии было основано на избирательном связывании активных групп сорбентов с полигистидиновым фрагментом на С-конце полипептидной последовательности целевого белка, в то время как применение аффинной хроматографии — на ассоциации с АТР-связывающими регионами Е7 и БТШ70. Степень чистоты целевого белка после обеих процедур не превысила 70%, что указывает на наличие множества низкомолекулярных примесей и продуктов олигомеризации целевой молекулы. Проведение хроматографической очистки в денатурирующих условиях с использованием сильных восстанавливающих агентов позволило выделить целевой белок, содержание мономера в котором превысило 97%. Посредством иммуноблотинга и электрофореза была установлена подлинность целевого белка, масс-спектрометрическим методом было показано соответствие его первичной структуры заявленной последовательности.

Ключевые слова:  белок теплового шока,  вакцина,  вирус папилломы человека.

Полная версия данной статьи находится на сайте Российской научной электронной библиотеки по адресу:  http://elibrary.ru/item.asp?id=23241248

26.10.2015, 5086 просмотров.