Водно-фенольная экстракция: новое применение для очистки интерферона-бета

Автор: А.И. Бобрускин, Н.Н. Панкеев, А.C. Журавко, Н.В. Кононова

Страница: 24-33

Водно-фенольная экстракция: новое применение для очистки интерферона-бета

Биотехнология. 2014, № 3, С. 24-33

УДК 577.4

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

А.И. Бобрускин ^*,  Н.Н. Панкеев,  А.C. Журавко,  Н.В. Кононова

Российская фармацевтическая компания ООО "Научно-производственный центр "ИБХ-РАН",  Москва, 117997

e-mail:  alexeybob@rambler.ru

Проведено сравнение мицеллярной и водно-фенольной экстракции с целью очистки рекомбинантного IFNβ-1b от эндотоксинов и белков клетки-хозяина. Показано, что эффективное удаление всех примесей происходило только с применением фенола. Подобраны условия для образования трех фаз: водной с липолполисахаридами, фенольной с интерфероном и нерастворимой, содержащей белки E. coli. Полное освобождение IFNβ-1b от белков клетки-хозяина легко достигалось путем последующей его очистки на ОФ ВЭЖХ-сорбенте.

Ключевые слова:  интерферон,  ОФ ВЭЖХ,  тритон Х-114,  фенол,  экстракция,  эндотоксины.

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Aqueous-Phenolic Extraction: a New Application to IFNβ Purification

A.I. Bobruskin ^*,  N.N. Pankeev,  А.S. Zhuravko,  and  N.V. Kononova

The Research-and-Technique Center IBKh-RAN,  117997, Moscow Russia

e-mail:  alexeybob@rambler.ru

In order to purify a recombinant IFNβ-1b from endotoxins and host cell proteins, we have compared micellar and phenolic extraction procedures. It was shown that all contaminants were only effectively eliminated by the water-phenolic extraction. The conditions for obtaining of three phases, aqueous with LPS, phenolic with IFN and water-insoluble with the E. coli residual proteins, were selected. IFNβ-1b was then completely purified from the host cell proteins by RP HPLC.

Key words:  endotoxins,  extraction,  interferon,  phenol,  RP HPLC,  Triton X-114.

02.09.2014, 5503 просмотра.