Разработка технологии промышленного культивирования штамма E. coli — продуцента фермента ULP-протеиназы, осуществляющего протеолитический процессинг SUMO-интерферона, гибридного белка-предшественника a-интерферона

Автор: Н.А.Литвинова, Н.В. Стратонова, В.С. Леонов, Р.А. Хамитов

Страница: 60-70

Разработка технологии промышленного культивирования штамма E. coli — продуцента фермента ULP-протеиназы, осуществляющего протеолитический процессинг SUMO-интерферона, гибридного белка-предшественника a-интерферона

Биотехнология, 2013, № 5, С. 60-70

УДК: 604.4:577.15

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

Н.А.Литвинова *,  Н.В. Стратонова,  В.С. Леонов,  Р.А. Хамитов

ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов»,  Москва, 117545

e-mail:  natalya.litvinova@bioprocess.ru

Разработан промышленный способ культивирования штамма E.coli — продуцента фермента ULP-протеиназы. В ходе исследования были оптимизированы состав питательных сред, процесс запуска индукции экспрессии целевого белка и массообменные характеристики культивирования: выращивание продуцента должно осуществляться при 20° без разбавления среды; в качестве индуктора более эффективна лактоза (0,5%); pH должен поддерживаться на уровне 6,9—7,1; аэрация должна составлять 10 л/мин при перемешивании 300 об/мин. При этом удается достигнуть продуктивности культуры по целевому белку (32±0,1) мг на 1 л КЖ, а хроматографически очищенный препарат ULP-протеиназы имеет чистоту более 95%.

Ключевые слова:  гибридный белок-предшественник,  интерферон альфа-2b,  оптимизация,  фермент ULP-протеиназа,  SUMO.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Development of Industrial Technology for Cultivation of E. coli Strain Producing an Enzyme of ULP-Proteinase that Accomplishes Proteolytic Processing of SUMO-IFN, a Hybrid Protein Precursor of a-Interferon

N.A. Litvinova *,  N.V. Stratonova,  V.S. Leonov,  and  R.A. Khamitov

The State Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms, 117545, Moscow Russia

e-mail:  natalya.litvinova@bioprocess.ru

A method for the industrial cultivation of an E. coli strain producing ULP-proteinase has been developed. The composition of nutrient medium,  process of launching of the induction of the target protein expression and mass-exchange characteristic of the cultivation were optimized. The growing should be performed at 20°C without medium dilution; lactose (0.5%) should be used as an inducer; pH should be 6.9—7.1; and aeration should be equal to 10 l/min at mixing of 300 rpm. The productivity by the target protein achieved under the above conditions was (32±0.1) mg/l of CL, whereas the chromatography-purified preparation of ULP-proteinase had more than 95% purity.

Key word:  hybrid precursor protein,  interferon alpha-2b,  optimization,  SUMO,  ULP-proteinase.

12.02.2014, 6354 просмотра.