Разработка технологии получения лиофилизованной субстанции рекомбинантного эритропоэтина человека

Автор: И.Ф. Радаева, М.Е. Колесова, В.С. Сереброва, Н.А. Вараксин, Т.Г. Рябичева, Н.В. Жилина, Е.А. Нечаева.

Страница: 67-73

Разработка технологии получения лиофилизованной субстанции рекомбинантного эритропоэтина человека

Биотехнология, 2013, № 2, С. 67-73

УДК 57.085.23

Раздел:  «Технология биопрепаратов»

И.Ф. Радаева ^*,  М.Е. Колесова,  В.С. Сереброва,  Н.А. Вараксин,  Т.Г. Рябичева,  Н.В. Жилина,  Е.А. Нечаева

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»», п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

e-mail:  radaeva@vector.nsc.ru

На основе культуры клеток CHOpE разработана технология получения лиофилизованной субстанции рекомбинантного эритропоэтина человека (рчЭПО) с заданной активностью с целью создания препарата для перорального и наружного применения. Технология включала следующие стадии: культивирование клеток, сбор культуральной жидкости, содержащей ЭПО, концентрирование и очистку с помощью фильтрации и сублимационное высушивание.  Молекулярная масса полученного рчЭПО по данным электрофореза составила 32—37,5 кДа. Субстанция рчЭПО представляет собой однородную гигроскопичную пористую массу желтого цвета, растворимую в дистиллированной воде; рН 1%-ного раствора равен 6,5—7,4. Пероральное введение субстанции вызывало достоверное повышение в 1,8—2 раза уровня ретикулоцитов в периферической крови мышей. Испытание субстанции рчЭПО на животных не выявило каких-либо токсических эффектов. При анализе микробиологической чистоты грибы, аэробные бактерии, бактерии семейства Entero­bac­te­ria­ceae, Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa в субстанции рчЭПО не обнаружены. Полученная субстанция может быть пригодна для использования в производстве готовых форм лекарственных препаратов рчЭПО, в том числе таблетированных.

Ключевые слова:  культура клеток СНОрЕ, рекомбинантный эритропоэтин человека, фармацевтическая субстанция.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Development of Technology for Production of Recombinant Human Erythropoetin Freeze-dried Substance

I.F. Radaeva ^*,  M.E. Kolesova,  V.S. Serebrova,  N.A. Varaksin,  T.G. Ryabicheva,  N.V. Zhilina,  and  E.A. Nechaeva

The State Research Center of Virology and Biotechnology Vector (SRC VB Vector), 630559, Koltsovo, Novosibirskaya ob­last Russia

e-mail:  radaeva@vector.nsc.ru

On the basis of CHOpE cell culture, a technology for the production of freeze-dried substance of recombinant human erythropoetin (rhEPO) with a set activity dedicated to peroral and external application has been developed. It includes the following stages: cell culturing, collection of EPO-containing culture liquid, concentration, purification by filtration and freeze-drying. The molecular mass the obtained of rhEPO was equal to 32—37,5 kD according to electrophoresis. The  substance  of  rhEPO comprises a homogeneous porous hygroscopic yellow mass soluble in distilled water; pH of the 1% solution was 6.5—7.4. Testing of rhEPO on animals failed to detect any signs of toxicity. The peroral introduction of the obtained tabletted substance in mice induced a reliable 1,8—2-fold increase in the number of rethiculocytes in peripheral blood. Fungi, aerobic bacteria, bacteria of the Enterobacteriaceae family, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were not detected in the preparation. The resulting substance can be suitable for the use in the manufacturing of rhEPO-containing final pharmaceuticals including tablet forms.

Key words:  СНОрЕ cell culture, pharmaceuticals substance, recombinant human erythropoetin.

24.07.2013, 4796 просмотров.