Создание стабильной клеточной линии — продуцента рекомбинантного дарбэпоэтина-альфа на основе клеток СНО

Автор: Р.Р. Шукуров, Н.В. Лобанова, И.Н. Савинова, И.Г. Воробьева, А.А. Нурбаков, Л.В. Ермолина, Н.В. Орлова, А.Г. Мосина, Л.П. Антонова, Р.А. Хамитов, Ю.А. Серегин.

Страница: 46-54

Создание стабильной клеточной линии — продуцента рекомбинантного дарбэпоэтина-альфа на основе клеток СНО

Биотехнология, 2013, № 2, С. 46-54

УДК 573.6

Раздел:  «Продуценты, биология, селекция, генетическая инженерия»

Р.Р. Шукуров ^{1, *},  Н.В. Лобанова ¹,  И.Н. Савинова ¹,  И.Г. Воробьева ¹,  А.А. Нурбаков ¹,  Л.В. Ермолина ²,  Н.В. Орлова ¹,  А.Г. Мосина ¹,  Л.П. Антонова ¹,  Р.А. Хамитов ²,  Ю.А. Серегин ¹

¹  ООО «ФАРМАПАРК», Москва, 117246

²  ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов», Москва, 117545

e-mail :  anamezon@gmail.com

В работе селекционирована стабильная клеточная линия на основе клеток CHO, продуцирующая 100 мг на 1 л среды рекомбинантного дарбэпоэтина-альфа с эффективным выходом целевых гликозилированных форм порядка 30%. Продукт экспрессии клеточной линии охарактеризовали и сравнили с оригинальным препаратом Аранесп (Amgen, США); показано, что полученный препрарат содержит все изоформы оригинального препарата. Сконструированная и селекционированная линия-­продуцент может использоваться для разработки схемы промышленного культивирования и очистки рекомбинантного дарбэпоэтина-альфа.

Ключевые слова:  дарбэпоэтин, клетки CHO, клеточная линия, трансфекция, экспрессия, эритропоэтин.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Design of stable cell line Producing recombinant darbepoetin alpha based on CHO cells

R.R. Shukurov ^{1, *},  N.V. Lobanova ¹,  I.N. Savinova ¹,  I.G. Vorobyova ¹,  A.A. Nurbakov ¹,  L.V. Ermolina ²,  N.V. Orlova ¹,  A.G. Mosina ¹,  L.P. Antonova ¹,  R.A. Khamitov ²,  and  Yu.A. Seryogin ¹

¹  The Limited Liability Company “PHARMAPARK”, 117246, Moscow Russia

²  The State Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms, 117545, Moscow Russia

e-mail:  anamezon@gmail.com

A stable cell line based on CHO cells that produces 100 mg per liter of culture medium of recombinant darbepoetin alpha with the target glycosylated isoforms effective yield of about 30% has been selected. The expression product of the cell line was characterized and compared to the originator (Aranesp, Amgen). It was shown that the obtained preparation contained all isoforms characteristic of the originator. The created cell line can be used for the development of industrial cultivation and purification scheme for the recombinant darbepoetin alpha production.

Key words:  cell line, CHO cells, darbepoetin, erythropoetin, expression, transfection.

24.07.2013, 4360 просмотров.