Оптимизация генетических конструкций для экспрессии гена дарбэпоэтина в клетках млекопитающих

Автор: Р.Р. Шукуров, К.Ю. Казаченко, Д. Г. Козлов, А.А. Нурбаков, Е.Н. Сауткина, Р.А. Хамитов, Ю.А. Серегин.

Страница: 34-45

Оптимизация генетических конструкций для экспрессии гена дарбэпоэтина в клетках млекопитающих

Биотехнология, 2013, № 2, С. 34-45

УДК 606:57.082.26

Раздел: «Продуценты, биология, селекция, генетическая инженерия»

Р.Р. Шукуров ^{1, *},  К.Ю. Казаченко ¹,  Д. Г. Козлов ²,  А.А. Нурбаков ¹,  Е.Н. Сауткина ²,  Р.А. Хамитов ²,  Ю.А. Серегин ¹.

¹ ООО «ФАРМАПАРК», Москва, 117246

² ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов», Москва, 117545

e-mail :  anamezon@gmail.com

С целью оптимизации продукции дарбэпоэтина в клетках СНО были разработаны генетические конструкции, характеризующиеся более высоким уровнем структурной оптимизации гена дарбэпоэтина, увеличенной дозой гена и выбором ранее не использовавшихся для этой цели промоторных элементов. Проведена транзиентная трансфекция клеток CHO полученными конструкциями и измерена продуктивность трансфицированных культур. Анализ полученных данных показал, что каждый из варьируемых элементов конструкций влиял на экспрессию гена дарбэпоэтина. Наибольшую эффективность показала конструкция, содержавшая удвоенную дозу синтетического гена дарбэпоэтина, имеющего оптимизированный кодоновый состав, под контролем химерного промотора CMV-EF1.

Ключевые слова:  дарбэпоэтин, клетки CHO, оптимизация кодонов, промотор, экспрессионные векторы, эритропоэтин.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Optimization of genetic constructs for high-level expression of Darbepoetin Gene in mammalian cells

R.R. Shukurov ^{1, *},  K.Yu. Kazachenko ¹,  D.G. Kozlov ²,  A.A. Nurbakov ¹,  E.N. Sautkina ², R.A.  Khamitov ²,  and  Yu.A. Seryogin ¹

¹ The Limited Liability Company “PHARMAPARK”, 117246, Moscow Russia

² The State Research Institute for Genetics and Selection of Industrial Microorganisms, 117545, Moscow Russia

e-mail:  anamezon@gmail.com

Genetic constructs that were characterized by a higher level of structural optimization of the gene for darbepoetin, higher gene dose and selection of promoter elements never used before for this gene investigation have been designed in order to optimize the darbepoetin production in CHO cells. A transient transfection of the CHO cells by the obtained constructs was performed. It was shown that each of the variable factors in the constructs influenced the darbepoetin gene expression. The construct containing a doubled dose of the darbepoetin synthetic gene with the optimized codon composition under the control of a CMV-EF1 chimerical promoter proved to be most efficient.

Key words:  CHO cells, codon optimization, darbepoetin-alpha, erythropoetin, expression vectors, promoter.

12.07.2013, 5759 просмотров.