Агробактериальная трансформация генеративных клеток кукурузы in planta

Автор: В.А.Великов(1,2), Е.А.Мамонтова(1), И.В.Волохина(1), М.И.Чумаков(1,2)*

¹ Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов, 410049

² Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского, Саратов, 410012

Метод генетической трансформации кукурузы (Zea mays (L.) Moench), основанный на агробактериальной трансформации цветущих растений in planta, был опробован на двух материнских и двух отцовских линиях кукурузы. Трансформацию осуществляли генетическими конструкциями, содержащими маркерные и репортерные гены неомицинфосфотрансферазы II (nptII) и b-глюкуронидазы (gus и gus-intron). Присутствие маркерных и репортерных генов в ДНК проростков, выросших из завязавшихся после обработки семян, определяли с помощью ПЦР и гистохимического анализа. Установлена эффективность встройки маркерных генов в геном двух диплоидных линий кукурузы — Коричневый маркер саратовский и АТ-3 — при оплодотворении пыльцой линий Зародышевый маркер саратовский и Зародышевый маркер саратовский пурпурный, соответственно. Для линии АТ-З, трансформированной конструкциями pTd33 и pA2069, эффективность составила 13 и 5,4 % от общего количества полученных семян, соответственно; для линии Коричневый маркер саратовский, трансформированной указанными конструкциями — 12,1 и 13,9 %, соответственно. В целом, эффективность метода, независимо от трансформируемой линии и переносимой конструкции, превышает эффективность традиционных способов агробактериальной трансформации через вегетативные клетки. Метод может быть использован для создания новых сортов и гибридов кукурузы, особенно при осуществлении трансформации линий с низкой регенерационной  способностью.

02.11.2010, 5447 просмотров.